Genetiki gözlegler geçirilende, köplenç RNK ýeterlik däl nusgalara duş gelýäris, mysal üçin kiçijik anatomiki agyz çişlerini, hatda bir öýjükli nusgalary we adam öýjüklerinde gaty pes derejede transkripsiýa edilen gen mutasiýa nusgalaryny öwrenmek üçin.Elbetde, COVID-19 synagy üçin, nusgalar wagtynda ýerinde bolmasa ýa-da ýeterlik gezek bolmasa, nusganyň ululygy gaty pes bolar, şonuň üçin Saglyk we Maşgalany meýilleşdiriş komissiýasy iki gün öň çykdy we synagdan geçdi we nuklein kislotasynyň nusgasy alty sany nusga almadyk bolsa, habar berip bilersiňiz.
Reagentiň duýgurlygy möhümdir, sebäbi bu mesele ýa-da şol mesele bar, şonuň üçin RT-PCR duýgurlygyny ýokarlandyrmak üçin näme edip bileris?
Mümkin bolan çözgütleri ara alyp maslahatlaşmazdan ozal, ýaňy agzap geçen ýagdaýymyz bilen iki sany uly kynçylygy belläliň.
Ilki bilen, mysalymyzda diňe birnäçe öýjükli ilat bar bolsa, RNK ýitirilmegi barada alada edýäris.Sütün usuly ýa-da nuklein kislotasynyň ýagyş usuly ýaly adaty aýyrmak we arassalamak usullary ulanylsa, birnäçe nusganyň ýitip gitmegi gaty ähtimal.Bir çözgüt, tRNA ýaly daşaýjy molekulany goşmak, ýöne şonda-da dikeldiş synagymyzyň gowy boljakdygyna kepillik ýok.
Onda has gowy ýol näme?Medeniýetli öýjükler ýa-da mikroanatomiki nusgalar üçin oňat warianty göni liz ulanmakdyr.
Öýjükleri 5 minut bölmek, RNK-ny ergine goýbermek, soňra reaksiýany 2 minut duruzmak, soň bolsa lizaty tersine transkripsiýa reaksiýasyna goşmak, hiç hili RNK ýitirilmezlik we netijede CDNA-ny göni goýmak. real wagt reaksiýasyna.
Startingöne çäkli başlangyç nokady ýa-da az mukdarda maksatly gen aňlatmasy sebäpli, ähli RNK-ny gaýtadan işläp bilsek we hakyky real wagt signalyny almak üçin ýeterlik şablonlar bilen üpjün etmesek näme etmeli?
Bu ýagdaýda güýçlendirmekden öňki ädim gaty peýdaly bolup biler.
Aşakda ters transkripsiýadan soň duýgurlygy ýokarlandyrmak shemasy bar.Başlamazdan ozal haýsy maksat bilen gyzyklanýandygymyzy aşak akymdan soramalydyrys, güýçlendirmek üçin bu maksatlar üçin ýörite başlangyçlary düzmeli.
100 jübüt primer we 10-14 gezek reaksiýa sikli bilen garyşyk primer döretmek arkaly gazanyp bolar.Şonuň üçin bu talap üçin ýörite döredilen Master Mix alnan CDNA-ny öňünden güýçlendirmek üçin zerurdyr.
10 bilen 14 aralygyndaky siklleriň sanyny kesgitlemegiň sebäbi, bu çäkli mukdarda siklleriň mukdar molekulýar maglumatlara mätäç gözlegçiler üçin möhüm bolan dürli nyşanlaryň arasynda tötänleýin bolmagy üpjün etmegidir.
Öň güýçlendirilenden soň, arka tarapdaky kesgitleme duýgurlygy ep-esli gowulaşar ýaly köp mukdarda cDNA alyp bileris, hatda tötänleýin ýalňyşlyklary aradan aýyrmak üçin nusgany eritip, real wagt PCR reaksiýalaryny ýerine ýetirip bileris.
Iş wagty: Apr-11-2023